一、無(wú)菌操作原則規(guī)定

1. 打疫苗病菌時(shí)務(wù)必穿工作服裝、戴工帽。     

2. 開展打疫苗食品類試品時(shí)，務(wù)必穿專用型的工作服裝、帽及涼拖，應(yīng)放到無(wú)菌車間緩沖間， 工作中前經(jīng)紫外線殺菌后應(yīng)用。      

3. 打疫苗食品類試品時(shí)，應(yīng)在進(jìn)無(wú)菌車間前要肥皂洗手，隨后用75％酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟?nbsp;    

4. 開展打疫苗常用的塑料吸管，平皿及培養(yǎng)液等務(wù)必經(jīng)消毒滅菌，開啟包裝未應(yīng)用完的容器，不可以置放后再應(yīng)用，金屬材料用品應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點(diǎn)燃灼燒三次后應(yīng)用。       

5從包裝中取下塑料吸管時(shí)，塑料吸管尖部不可以碰觸露出位置，應(yīng)用塑料吸管打疫苗于試管嬰兒或平皿時(shí)，塑料吸管尖不可碰觸試管嬰兒或平皿邊。      

6.打疫苗試品、轉(zhuǎn)種病菌務(wù)必在酒精噴燈前實(shí)際操作，打疫苗病菌或試品時(shí)，塑料吸管從包裝中取下后及開啟試管嬰兒塞都需要根據(jù)火苗消毒殺菌。      

7.接種環(huán)和針在打疫苗病菌前要經(jīng)火苗灼燒所有鐵絲，必需時(shí)也要燒到環(huán)和針與桿的相接處，打疫苗結(jié)核桿菌和最烈菌的接種環(huán)應(yīng)在開水中燒開5min，再經(jīng)火苗灼燒。

8. 塑料吸管汲取菌液或試品時(shí)，運(yùn)用相對(duì)應(yīng)的橡皮頭汲取，不可立即用口吸。
       二、無(wú)菌檢測(cè)間應(yīng)用規(guī)定

1、無(wú)菌檢測(cè)間通往外邊的窗子應(yīng)是雙層中空玻璃，并要密封性，不可隨便開啟，并設(shè)立與無(wú)菌檢測(cè)間尺寸相對(duì)應(yīng)的緩沖間及移門，另設(shè)立0.5-0.7平米的小窗，以便進(jìn)到無(wú)菌檢測(cè)間后傳送物件。

2、無(wú)菌檢測(cè)間內(nèi)要保持干凈，工作中完用2%-3%煤酚皂水溶液消毒殺菌，擦洗工作中櫥柜臺(tái)面，不可儲(chǔ)放與實(shí)驗(yàn)不相干的物件。      

3、無(wú)菌檢測(cè)間應(yīng)用前后左右應(yīng)把門關(guān)嚴(yán)， 開啟紫外線殺菌燈，如選用房間內(nèi)懸吊訓(xùn)練紫外燈消毒時(shí)，需30W紫外線殺菌燈，間距在1.0M處，直射時(shí)間不少于30min，應(yīng)用紫外線殺菌燈，應(yīng)留意不可立即在紫外光下實(shí)際操作，以防造成損害，led燈管每過(guò)兩個(gè)星期要用酒精棉球輕輕地擦洗，去除上邊塵土和油污，以降低紫外光透過(guò)的危害。      

4、解決和打疫苗食品類標(biāo)本采集時(shí)，進(jìn)到無(wú)菌檢測(cè)間實(shí)際操作，不可隨便進(jìn)出，如必須傳送物件，可根據(jù)小窗傳送。      

5、在無(wú)菌檢測(cè)間內(nèi)如必須裝空調(diào)時(shí)，則應(yīng)該有過(guò)濾系統(tǒng)。

三、消毒滅菌規(guī)定
微生物檢驗(yàn)用的玻璃容器、金屬材料用品及培養(yǎng)液、被環(huán)境污染和打疫苗的塑造物等，務(wù)必經(jīng)殺菌后才能應(yīng)用。殺菌方法有空氣干燥和寒濕髙壓蒸汽鍋滅菌方法和間歇性滅菌方法
1、殺菌前提前準(zhǔn)備

（1）全部必須殺菌的物件最先應(yīng)清理晾曬，玻璃容器如塑料吸管、平皿用包裝紙盒嚴(yán)實(shí)，如用金屬材料筒應(yīng)將上邊通氣口開啟。

（2）裝培養(yǎng)液的三角瓶蓋，用紙包裝好，試管嬰兒蓋好蓋，注射針須將芯管抽出來(lái)，用沙布包好。 

2、裝放

（1）干熱滅菌器：裝放物件不能過(guò)擠，且不可以觸碰箱的四壁。

（2）大中型髙壓蒸汽鍋：：置放殺菌物件各自捆扎好，立即放進(jìn)消毒殺菌筒內(nèi)，物件中間不可以 過(guò)擠。

3、機(jī)器設(shè)備查驗(yàn)

（1）查驗(yàn)門的電源開關(guān)是不是靈便，橡膠圈有沒(méi)有毀壞，是不是整平。

（2）查驗(yàn)氣壓表蒸汽排盡時(shí)是不是滯留在零位，關(guān)好門和蓋，通蒸汽或加溫后，觀查是式壓力鍋或立柱式工作壓力蒸汽蒸汽滅菌器的應(yīng)用應(yīng)按以下流程開展：

①手提壓力鍋在行為主體內(nèi)添加3L冷水，立柱式壓力鍋放水16L（多次重復(fù)使用時(shí)要將水 量補(bǔ)充，使水變渾濁需拆換）.

②手提壓力煲將機(jī)蓋上的排汽管插進(jìn)消毒殺菌桶內(nèi)腔的方鋼管中（無(wú)塑料軟管或塑料軟管生銹裂開的蒸汽滅菌器不可應(yīng)用）。

③蓋好機(jī)蓋扭緊，勿使漏汽；置蒸汽滅菌器于明火上加溫，立柱式壓力煲通上開關(guān)電源，并開啟機(jī)蓋上的自動(dòng)排氣閥放了冷氣機(jī)（水沸騰后排氣管10-15min）。

④關(guān)掉自動(dòng)排氣閥，使蒸汽壓升高到要求規(guī)定，并保持要求時(shí)間（按殺菌物件特性與相關(guān)狀況而定）。

⑤做到要求時(shí)間后，對(duì)需干躁的物件，立即打開自動(dòng)排氣閥排出來(lái)蒸汽，待工作壓力修復(fù)到零時(shí)，當(dāng)然制冷至 60℃后打開表蓋取放，若為液態(tài)物件，不必開啟自動(dòng)排氣閥，而應(yīng)該馬上將鍋除去熱原，待當(dāng)然制冷，工作壓力修復(fù)至零，溫度降至60℃下列再打開表蓋取放，防止忽然緩解壓力液態(tài)強(qiáng)烈燒開或器皿工程爆破。   

（3）立式壓力煲蒸汽蒸汽滅菌器的應(yīng)用按以下流程開展：

①關(guān)嚴(yán)鍋門，開啟旁通閥，將蒸汽引進(jìn)隔層開展加熱，隔層內(nèi)強(qiáng)冷空氣經(jīng)阻氣器全自動(dòng)排出來(lái)。

② 隔層做到預(yù)訂溫度后，開啟鍋室旁通閥，將蒸汽引進(jìn)鍋室，鍋房間內(nèi)強(qiáng)冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器全自動(dòng)排出來(lái)。

③待鍋室做到要求的工作壓力與溫度時(shí)，調(diào)整旁通閥，使維持穩(wěn)定。

④當(dāng)然或人力減溫至60℃再開關(guān)門取放，不可應(yīng)用迅速排出來(lái)蒸汽法，防止忽然降血壓，液態(tài)強(qiáng)烈燒開或器皿工程爆破。

⑤應(yīng)用全自動(dòng)系統(tǒng)控制式工作壓力蒸汽蒸汽滅菌器，在擺好物件關(guān)嚴(yán)門后，應(yīng)依據(jù)物件類型按 動(dòng)相對(duì)應(yīng)電源開關(guān)，便于按要求程序流程全自動(dòng)開展殺菌，殺菌時(shí)務(wù)必運(yùn)用附屬儀表盤紀(jì)錄溫度與時(shí)間以備查簿，實(shí)際操作規(guī)定應(yīng)嚴(yán)苛依照生產(chǎn)廠家使用說(shuō)明開展。

四、殺菌后處理工藝

殺菌后物件，按一切正常狀況已屬無(wú)菌檢測(cè)，從蒸汽滅菌器中取下應(yīng)認(rèn)真仔細(xì)置放，以防再一次環(huán)境污染。    

1.物件取下，隨后查驗(yàn)包裝的一致性，若有毀壞或棉塞脫下，不能做為無(wú)菌檢測(cè)物件應(yīng)用。   

2.取下的物件，若為包裝有顯著的浸水者，不能做為無(wú)菌檢測(cè)物件應(yīng)用。

3.培養(yǎng)液或?qū)嶒?yàn)試劑等，應(yīng)查驗(yàn)是不是合乎做到殺菌后的顏色或情況，未做到者應(yīng)廢料。

4.開閉式器皿，在取下時(shí)要將圓孔篩關(guān)掉。

5.取下的物件墜落在地或誤放不干凈的這個(gè)，或粘有水濕，均視作遭受環(huán)境污染，不能做為無(wú)菌檢測(cè)物件應(yīng)用。

6.取下的達(dá)標(biāo)殺菌物件，應(yīng)儲(chǔ)放于儲(chǔ)物間或防污柜里，禁止與未殺菌物件混存。

7.凡屬達(dá)標(biāo)物件，應(yīng)標(biāo)著殺菌日期及有效期。

8.每次殺菌解決進(jìn)行后，紀(jì)錄殺菌產(chǎn)品名、總數(shù)、溫度、時(shí)間、作業(yè)者。

五、有害有菌廢棄物解決規(guī)定

微生物實(shí)驗(yàn)常用實(shí)驗(yàn)器材、塑造物等沒(méi)經(jīng)消毒殺菌解決，一律不可帶出實(shí)驗(yàn)室。

1、經(jīng)塑造的環(huán)境污染原材料及廢料應(yīng)放到嚴(yán)實(shí)的器皿或細(xì)鐵絲筐內(nèi)，并集中化儲(chǔ)放在特定地址，待統(tǒng)一開展高壓滅菌。

2、經(jīng)微生物環(huán)境污染的塑造物，務(wù)必經(jīng)121℃30min高壓滅菌。

3、染菌后的塑料吸管，應(yīng)用后放進(jìn)5%煤酚皂水溶液或石炭酸液中，至少泡浸24小時(shí)（消毒殺菌液態(tài)不可小于泡浸的高寬比）再經(jīng)121℃30 min高壓滅菌。

4、玻片上色清洗片的液態(tài)，一般可立即沖進(jìn)下水管道，最烈菌的清洗液務(wù)必沖在量杯 中，經(jīng)高壓滅菌后才可倒進(jìn)下水管道，上色的裝片放進(jìn)5%煤酚皂水溶液中泡浸24小時(shí)后，燒開清洗。做凝結(jié)實(shí)驗(yàn)用的裝片或平皿，務(wù)必高壓滅菌后清洗。

5、粉碎的塑造物，馬上用5%煤酚皂水溶液或石炭酸液噴撒和泡浸被環(huán)境污染位置，泡浸三十分鐘后再擦洗整潔。

環(huán)境污染的工作服裝或開展最烈實(shí)驗(yàn)所穿的工作服裝、帽、防護(hù)口罩等，應(yīng)放進(jìn)專用型消毒殺菌袋內(nèi)，經(jīng)高壓滅菌后才能清洗。

六、培養(yǎng)液制取規(guī)定

培養(yǎng)液制取的品質(zhì)將立即危害微生物生長(zhǎng)發(fā)育。由于各種各樣微生物對(duì)其營(yíng)養(yǎng)成分規(guī)定不完全一致，塑造目地的不一樣，各種各樣培養(yǎng)液制取規(guī)定以下：

1、依據(jù)培養(yǎng)液秘方的成份按量稱量，隨后溶解純凈水中，在應(yīng)用前對(duì)運(yùn)用的實(shí)驗(yàn)試劑藥物應(yīng)開展產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)。

2、PH 測(cè)量及調(diào)整：PH測(cè)量要在培養(yǎng)液冷至室內(nèi)溫度時(shí)開展，因在熱或冷的狀況下，其PH有一定差別，當(dāng)測(cè)量費(fèi)力羅，按測(cè)算量添加堿或酸攪拌后，應(yīng)再檢測(cè)一次。培養(yǎng)液 PH值一定要精確，不然會(huì)危害微生物的生長(zhǎng)發(fā)育或危害結(jié)果的觀查。但特別注意因高壓滅菌可危害一些培養(yǎng)液的 PH 減少或上升，故不適合殺菌工作壓力過(guò)高或頻次過(guò)多，以防危害培養(yǎng)液的品質(zhì)，顯色劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調(diào)過(guò)PH后再添加。

3、培養(yǎng)液需維持回應(yīng)，以便觀查病菌的生長(zhǎng)發(fā)育狀況，培養(yǎng)液加溫?zé)_后，可以用藥棉 花或絲絨布過(guò)慮，以去除沉淀，必需時(shí)可以用雞蛋回應(yīng)解決，常用瓊脂條要事先清洗晾曬后應(yīng)用，防止因瓊脂含殘?jiān)：η逦取?/span>

4、盛放培養(yǎng)液不適合用鐵、銅等器皿，應(yīng)用清洗的中性化硬質(zhì)的玻璃器皿為好。

5、培養(yǎng)液的殺菌既要做到徹底殺菌目地，又要留意不因加溫而減少其營(yíng)養(yǎng)成分，一般121℃15min就可以，若為帶有不抗高燒化學(xué)物質(zhì)的培養(yǎng)液如糖原、血清蛋白、果膠等，則應(yīng)選用超低溫殺菌或間歇性法殺菌，一些不可以加溫的實(shí)驗(yàn)試劑如亞碲酸鉀、卵黃、TTC、抗菌藥等，待基本瓊脂高壓滅菌后涼至50℃上下再添加。

6、每次培養(yǎng)液制取好后，應(yīng)做無(wú)菌檢測(cè)生長(zhǎng)發(fā)育實(shí)驗(yàn)及所檢菌種生長(zhǎng)發(fā)育實(shí)驗(yàn)。如果是生物化學(xué)塑造 基，應(yīng)用規(guī)范菌種打疫苗塑造，觀查生化反應(yīng)結(jié)果，應(yīng)呈一切正常反映，培養(yǎng)基不應(yīng)貯存太久，必需時(shí)可置4℃電冰箱存放。

7、現(xiàn)階段各種各樣干躁培養(yǎng)基較多，每次要用規(guī)范菌種開展生長(zhǎng)發(fā)育實(shí)驗(yàn)或生化反應(yīng)觀查，各種各樣培養(yǎng)基用相對(duì)應(yīng)菌種生長(zhǎng)發(fā)育實(shí)驗(yàn)優(yōu)良后才可運(yùn)用，新購(gòu)入的或存放太久的干躁培養(yǎng)基，在配置時(shí)也應(yīng)測(cè)PH，應(yīng)用時(shí)要依據(jù)產(chǎn)品手冊(cè)使用量和方式開展。

8、每次制取的培養(yǎng)基常用化學(xué)藥品、殺菌狀況及菌種生長(zhǎng)發(fā)育實(shí)驗(yàn)結(jié)果、制作人等應(yīng)搞好紀(jì)錄，以便查看。